MUT Plasmide Double Nickase (h): sc-406555-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MUT Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MUT Double Nickase Plasmid (h) e il MUT Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MUT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MUT Antibody (D-1): sc-390978
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MUT Plasmide Double Nickase (h) | sc-406555-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MUT Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406555-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **MUT** codifica la metilmalonil‑CoA mutasi, un enzima mitocondriale dipendente dall’adenosilcobalamina che catalizza l’isomerizzazione dell’L‑metilmalonil‑CoA in succinil‑CoA, collegando il catabolismo del propionato al ciclo dell’acido tricarbossilico. Questa attività integra il metabolismo degli amminoacidi a catena ramificata e degli acidi grassi a catena dispari con la produzione energetica mitocondriale e con il flusso anaplerotico. L’alterazione della funzione di MUT perturba l’omeostasi metabolica mitocondriale ed è fortemente associata all’acidemia metilmalonica, un errore congenito del metabolismo prototipico caratterizzato dall’accumulo di metilmalonato e da conseguenti risposte cellulari allo stress. Di conseguenza, MUT è ampiamente studiato in vie che coinvolgono l’utilizzo del cofattore vitamina B12, il metabolismo mitocondriale e la modellizzazione delle malattie metaboliche in sistemi cellulari umani.
MUT Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MUT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MUT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MUT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MUT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.