Muskelin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409182-ACT

O MKLN1 humano codifica a muskelina, uma proteína scaffold multidomínio implicada na organização da arquitetura do citoesqueleto e na coordenação do tráfego intracelular. A muskelina tem sido associada a processos dependentes de actina, ao transporte de vesículas e à renovação regulada de complexos proteicos, sustentando o controlo espacial da sinalização e a dinâmica dos recetores. Por meio destas funções, o MKLN1 pode influenciar vias que regulam a adesão e migração celulares e a proteostase, as quais são frequentemente remodeladas na biologia do cancro e em contextos neurobiológicos. A expressão desregulada ou perturbações em redes associadas à muskelina têm sido estudadas quanto ao seu impacto na morfologia celular, nas respostas ao stress e na homeostase da sinalização em modelos relevantes para doenças.

Muskelin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MKLN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Muskelin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MKLN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MKLN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Muskelin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MKLN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Muskelin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Muskelin em células tumorais com expressão de MKLN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.