Mucin 6/MUC6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402946-ACT

MUC6 codifica la mucina 6, una mucina secreta ad alto peso molecolare, fortemente O-glicosilata, che contribuisce alla barriera mucosa viscoelastica sulle superfici epiteliali, in particolare nel tratto gastrointestinale. Formando matrici mucose di tipo gel e interagendo con altre mucine e con i fattori trefoil, MUC6 favorisce la protezione dell’epitelio, la lubrificazione e la difesa innata contro stress chimici e microbici. La sua espressione è regolata durante la differenziazione epiteliale e il rimodellamento infiammatorio, collegando la biologia di MUC6 all’omeostasi della mucosa e a programmi di segnalazione associati alla barriera. Alterazioni nei pattern di espressione delle mucine, inclusa la disregolazione di MUC6, sono frequentemente studiate nel contesto di metaplasia, infiammazione cronica e trasformazione epiteliale nello stomaco e in altri tessuti mucosali.

Mucin 6/MUC6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MUC6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Mucin 6/MUC6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MUC6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MUC6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Mucin 6/MUC6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MUC6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Mucin 6/MUC6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Mucin 6/MUC6 nelle cellule tumorali con espressione di MUC6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.