CRISPRデータではありません：画像はCRISPR実験結果を可視化するための抗体の品質を示しています。
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Mucin 5AC/MUC5AC Double Nickaseプラスミド (m): sc-421752-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Mucin 5AC/MUC5AC Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Mucin 5AC/MUC5ACダブルニカースプラスミド（m）およびMucin 5AC/MUC5ACダブルニカースプラスミド（m2）は、Muc5acを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Mucin 5AC/MUC5AC 抗体 (45M1): sc-21701
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Mucin 5AC/MUC5AC Double Nickaseプラスミド (m) | sc-421752-NIC | 20 µg | $410.00 |
Muc5ac は、ゲル形成性ムチンである Mucin 5AC/MUC5AC をコードしている。Mucin 5AC/MUC5AC は O-結合型糖鎖が高度に付加された分泌性糖タンパク質で、マウス上皮における気道および消化管の粘液バリアの主要な構造成分である。その発現は制御されており、粘液の粘弾性を規定して病原体の細胞表面への接触を抑えることで、粘液線毛クリアランス、上皮の水分保持、ならびに自然免疫防御を支えている。Muc5ac は上皮分化や炎症性リモデリングの過程で、EGFR/MAPK シグナル伝達や IL-13–STAT6 によって駆動される杯細胞化生など、サイトカインおよびストレス応答性のプログラムを介して誘導される。Muc5ac 産生の制御破綻やムチンの糖鎖修飾の変化は、呼吸器疾患モデルにおける粘液栓形成や慢性炎症、さらに消化管病態における上皮バリア変化と関連しており、気道過分泌や粘膜免疫の研究で一般的な評価指標となっている。
Mucin 5AC/MUC5AC ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Muc5ac 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Muc5ac内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Muc5acの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Muc5acが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。