mtTFA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401208-ACT

TFAMは、ミトコンドリア転写因子A（mtTFA）をコードしている。mtTFAは高移動度群（HMG）DNA結合タンパク質であり、ミトコンドリアDNA（mtDNA）をヌクレオイドとしてパッケージ化するとともに、mtDNAの複製および転写を協調的に制御する。mtTFAは、mtDNAコピー数とプロモーターへのアクセス性を調節することにより、ミトコンドリア生合成、酸化的リン酸化能、ならびにミトコンドリアゲノムの完全性維持の中核を担う。TFAM発現の攪乱は、呼吸機能の変化、ミトコンドリア・ストレスシグナルの亢進、そして広範な代謝リプログラミングと関連しており、神経変性、心代謝機能障害、がんに伴うミトコンドリアリモデリングの研究において重要である。ミトコンドリアから核への情報伝達における主要な結節点として、TFAMはレトログレードシグナル伝達、活性酸素（ROS）恒常性、アポトーシス感受性の解析にしばしば用いられる。

mtTFA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TFAMの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

mtTFA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TFAM 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTFAM転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性mtTFAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTFAM遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるmtTFA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTFAM発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるmtTFA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。