Mts1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401774

Panoramica

S100A4 codifica Mts1, una proteina della famiglia S100 che lega Ca2+ e agisce come regolatore della dinamica del citoscheletro, della motilità cellulare e della segnalazione intercellulare. Mts1 interagisce con bersagli quali la miosina II non muscolare e componenti del rimodellamento dell’actina, influenzando il turnover dell’adesione, la migrazione e le risposte alla matrice extracellulare. È espressa in diversi tipi cellulari, inclusi i fibroblasti e popolazioni immunitarie, ed è spesso utilizzata come marcatore di programmi stromali attivati. Una deregolazione dell’espressione di S100A4 è stata associata a rimodellamento infiammatorio e a fenotipi di invasione/metastatizzazione associati ai tumori, rendendola rilevante per studi su fibrosi tissutale, traffico delle cellule immunitarie e disseminazione delle cellule tumorali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Mts1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene S100A4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del S100A4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto S100A4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Mts1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di S100A4 per lo studio della segnalazione di Mts1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni S100A4 critici per la funzione di Mts1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di S100A4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Mts1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Mts1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus S100A4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Mts1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Mts1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia S100A4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio S100A4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.