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mTOR慢病毒激活颗粒(m) | sc-425273-LAC | 200 µl | $455.00 |
小鼠 Mtor 基因编码丝氨酸/苏氨酸激酶 mTOR。mTOR 是细胞生长的主调控因子,整合氨基酸可用性、能量状态、氧张力以及生长因子信号,以协调合成代谢与分解代谢程序。作为 mTORC1 和 mTORC2 的催化核心,mTOR 通过 S6K 和 4E-BP1 调控蛋白质合成,并参与脂质与核苷酸代谢、抑制自噬,以及通过 Akt/SGK 信号调控细胞骨架组织。mTOR 信号与 PI3K–Akt、AMPK、TSC1/2–Rheb 以及 Rag GTP 酶通路相互衔接,以平衡细胞增殖、应激适应与代谢稳态。mTOR 活性失调在肿瘤生物学、神经发育与突触可塑性、免疫细胞激活以及代谢性疾病模型中被广泛研究,使其成为小鼠体系中进行机制性通路解析的关键枢纽节点。
mTOR 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Mtor 表达。
mTOR 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Mtor转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性mTOR表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Mtor 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。