MRP6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402219
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- MRP6 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico MRP6, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:MRP6 Anticorpo (M6II-31): sc-59618
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
MRP6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402219 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
ABCC6 codifica o transportador da família ABC MRP6, uma bomba de efluxo da membrana plasmática expressa predominantemente no fígado e nos rins, que regula a homeostase extracelular de nucleotídeos e metabólitos. A atividade da MRP6 influencia a sinalização purinérgica e o equilíbrio do pirofosfato inorgânico, conectando a função do transportador a vias que controlam a mineralização ectópica e a integridade do tecido conjuntivo. Variantes com perda de função em ABCC6 estão associadas ao pseudoxantoma elástico e a fenótipos relacionados de calcificação, tornando-o um alvo relevante para estudar a remodelação da matriz extracelular, a calcificação vascular e a biologia de transportadores específica de tecidos. Modelos de ABCC6/MRP6 também permitem investigar o tráfego de transportadores ABC, o transporte de substratos dependente de ATP e vias compensatórias entre proteínas de resistência a múltiplos fármacos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MRP6 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ABCC6 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ABCC6, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ABCC6 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MRP6.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ABCC6 para a investigação da sinalização de MRP6, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ABCC6 críticos para a função MRP6
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ABCC6 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo MRP6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo MRP6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ABCC6. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo MRP6 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR MRP6 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ABCC6 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ABCC6 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.