MRP-S25 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425723-ACT

Mrps25 codifica a proteína ribossômica mitocondrial murina MRP-S25, um componente da subunidade pequena do mitorribossomo, necessária para a tradução de subunidades da fosforilação oxidativa codificadas pelo genoma mitocondrial. Ao sustentar a síntese proteica mitocondrial, a MRP-S25 contribui para a montagem da cadeia respiratória, a produção de ATP e a manutenção do potencial de membrana mitocondrial, conectando-se a vias centrais de bioenergética e proteostase. A perturbação de proteínas do mitorribossomo pode prejudicar a fosforilação oxidativa e elevar as espécies reativas de oxigênio, processos implicados em fenótipos neuromusculares e metabólicos, bem como em respostas ao estresse relevantes para o metabolismo de células cancerosas. Assim, a regulação de Mrps25 é de interesse para estudar o controle da tradução mitocondrial e os efeitos downstream sobre a aptidão celular.

MRP-S25 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mrps25 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MRP-S25 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mrps25 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mrps25, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MRP-S25. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mrps25 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MRP-S25 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MRP-S25 em células tumorais com expressão de Mrps25 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.