Moesin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401065-ACT

O gene humano MSN codifica a moesina, um membro da família ERM (ezrina–radixina–moesina) que conecta a F-actina cortical a proteínas transmembrana para organizar a estrutura e a mecânica da membrana. A moesina regula a remodelação do citoesqueleto de actina, a forma celular, a adesão e a migração por meio de ativação dependente de fosforilação e da participação em sinalização associada a GTPases Rho e a PI(4,5)P2. Ao coordenar a formação de microvilosidades, a polarização de células imunes e a dinâmica da barreira endotelial, a moesina influencia processos como o tráfego celular e a organização tecidual. A atividade desregulada de ERM e a sinalização do citoesqueleto são frequentemente investigadas no contexto de invasividade alterada, potencial metastático e comportamento aberrante de células imunes em modelos de doença.

Moesin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MSN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Moesin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MSN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MSN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Moesin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MSN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Moesin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Moesin em células tumorais com expressão de MSN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.