MOB1B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416280-ACT

MOB1B (ativador de quinase MOB 1B) codifica um coativador conservado das quinases LATS1/2 na via de sinalização Hippo, sustentando cascatas de fosforilação que regulam a atividade de YAP/TAZ, programas transcricionais e o controle do crescimento dependente de contato. Por meio da modulação da via Hippo, MOB1B contribui para a progressão do ciclo celular, a apoptose e a manutenção da homeostase tecidual. A perturbação de componentes da via Hippo, incluindo reguladores da família MOB, está associada a fenótipos de proliferação e migração alterados, frequentemente estudados no contexto da sinalização oncogênica e da integridade epitelial. Assim, MOB1B é relevante para investigar a comunicação cruzada (cross-talk) da via com MAPK, PI3K-AKT e redes de remodelamento do citoesqueleto que influenciam decisões de destino celular.

MOB1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MOB1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MOB1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MOB1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MOB1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MOB1B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MOB1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MOB1B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MOB1B em células tumorais com expressão de MOB1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.