MMP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421674-ACT

O gene Mmp2 de camundongo codifica a metaloproteinase-2 da matriz (MMP2), uma endopeptidase dependente de zinco que cliva componentes da matriz extracelular, como colágeno tipo IV e gelatina, para regular a remodelação da membrana basal. A atividade da MMP2 coordena-se com a sinalização por integrinas, a biodisponibilidade de fatores de crescimento e redes de proteases, incluindo TIMPs e a ativação do plasminogênio, moldando programas de migração celular, invasão e reparo tecidual. Por seus papéis na remodelação angiogênica, no tráfego de células inflamatórias e na reorganização do estroma, alterações na expressão ou no estado de ativação da MMP2 são amplamente estudadas em fibrose, artrite, neuroinflamação e na biologia do microambiente tumoral. Em modelos murinos, Mmp2 oferece um ponto de entrada manejável para dissecar mudanças, impulsionadas pela proteólise extracelular, em adesão, mecanotransdução e função de barreira.

MMP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mmp2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MMP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mmp2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mmp2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MMP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mmp2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MMP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MMP2 em células tumorais com expressão de Mmp2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.