MMP-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400727-ACT

O MMP3 humano codifica a metaloproteinase de matriz 3 (MMP-3, estromelisina-1), uma endopeptidase secretada dependente de zinco que remodela a matriz extracelular ao clivar proteoglicanos, fibronectina, laminina e outros componentes da matriz. A MMP-3 também pode ativar outros zimogênios de MMP, amplificando cascatas proteolíticas que influenciam a migração celular, o reparo tecidual, a angiogênese e a sinalização inflamatória no meio extracelular. Sua expressão é regulada a jusante de vias responsivas a citocinas e fatores de crescimento, incluindo os programas de NF-κB e AP-1/MAPK, conectando a renovação da matriz a estados de ativação imune e estromal. A atividade desregulada de MMP3 tem sido associada à remodelação patológica da matriz observada em artrite, doenças cardiovasculares, fibrose e biologia da invasão tumoral, tornando-o um marcador amplamente utilizado e um nó mecanístico em pesquisas focadas no microambiente.

MMP-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MMP3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MMP-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MMP3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MMP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MMP-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MMP3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MMP-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MMP-3 em células tumorais com expressão de MMP3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.