Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
MLSN1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406812
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MLSN1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico MLSN1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MLSN1 Antibody (F-3): sc-515228
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MLSN1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-406812 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
TRPM1 codifica il canale cationico della sottofamiglia melastatina MLSN1, un canale TRP permeabile al Ca2+ che contribuisce all’eccitabilità di membrana e alla segnalazione intracellulare del calcio. Nelle cellule bipolari ON della retina, TRPM1 funge da effettore chiave a valle del recettore metabotropico del glutammato 6 (mGluR6) nella fototrasduzione, accoppiando l’input sinaptico glutammatergico a risposte depolarizzanti. Al di fuori della retina, il flusso di calcio mediato da TRPM1 può influenzare programmi di segnalazione che si intersecano con vie dei secondi messaggeri e con la regolazione trascrizionale. L’alterazione genetica o la disregolazione di TRPM1 è stata associata a difetti della segnalazione visiva ed è anche oggetto di studio nella biologia legata alla pigmentazione, a supporto della sua rilevanza per la neurobiologia e per processi associati ai melanociti.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MLSN1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TRPM1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TRPM1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TRPM1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MLSN1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TRPM1 per lo studio della segnalazione di MLSN1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni TRPM1 critici per la funzione di MLSN1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TRPM1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal MLSN1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MLSN1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TRPM1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal MLSN1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MLSN1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TRPM1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TRPM1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.