MKP-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400850

Visão geral

DUSP6 codifica a fosfatase de dupla especificidade MKP-3, uma fosfatase citosólica de MAPK que desfosforila e inativa preferencialmente ERK1/2 (MAPK3/MAPK1), modulando a magnitude e a duração da sinalização RTK–RAS–RAF–MEK–ERK. Ao fornecer feedback negativo sobre a atividade de ERK, a MKP-3 influencia programas de proliferação, diferenciação e resposta ao estresse, e ajuda a manter a homeostase da sinalização em contextos dirigidos por sinais de fatores de crescimento, como as vias de FGFR e EGFR. Alterações na expressão ou na atividade de DUSP6 têm sido associadas à desregulação da sinalização de MAPK observada em diversos cenários relevantes para doenças, incluindo ativação oncogênica de vias, respostas inflamatórias e fenótipos do desenvolvimento. Como reguladora-chave da via, a MKP-3 é frequentemente estudada por seu papel no controle por feedback, na adaptação da sinalização e em saídas transcricionais dependentes de ERK.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MKP-3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DUSP6 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DUSP6, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DUSP6 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MKP-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DUSP6 para a investigação da sinalização de MKP-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DUSP6 críticos para a função MKP-3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DUSP6 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MKP-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo MKP-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DUSP6. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MKP-3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR MKP-3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DUSP6 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DUSP6 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.