MKP-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400850

Panoramica

DUSP6 codifica la fosfatasi a doppia specificità MKP-3, una fosfatasi citosolica delle MAPK che de-fosforila e inattiva preferenzialmente ERK1/2 (MAPK3/MAPK1), modulando l’intensità e la durata della segnalazione RTK–RAS–RAF–MEK–ERK. Fornendo un feedback negativo sull’attività di ERK, MKP-3 influenza programmi di proliferazione, differenziamento e risposta allo stress e contribuisce a mantenere l’omeostasi della segnalazione in contesti guidati da segnali di fattori di crescita, come le vie FGFR ed EGFR. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di DUSP6 sono state associate a una segnalazione MAPK deregolata osservata in diversi contesti rilevanti per la malattia, inclusi l’attivazione oncogenica di vie di segnalazione, risposte infiammatorie e fenotipi dello sviluppo. In quanto “gatekeeper” della via, MKP-3 è spesso studiata per il suo ruolo nel controllo del feedback, nell’adattamento della segnalazione e negli output trascrizionali dipendenti da ERK.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MKP-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DUSP6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DUSP6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DUSP6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MKP-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DUSP6 per lo studio della segnalazione di MKP-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DUSP6 critici per la funzione di MKP-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DUSP6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MKP-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MKP-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DUSP6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MKP-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MKP-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DUSP6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DUSP6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.