MIF Plasmide Double Nickase (h): sc-400574-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MIF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MIF Double Nickase Plasmid (h) e il MIF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MIF. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MIF Antibody (D-2): sc-271631
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MIF Plasmide Double Nickase (h) | sc-400574-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MIF Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400574-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il fattore inibitore della migrazione dei macrofagi (MIF) è una citochina pleiotropica e una proteina enzimatica che regola le risposte immunitarie innate e adattative modulando l’attivazione dei macrofagi, il traffico dei leucociti e la produzione di mediatori infiammatori. Interagisce con la segnalazione mediata da recettori tramite CD74 e recettori delle chemochine come CXCR2/CXCR4/CXCR7, attivando a valle le vie MAPK e NF-κB che influenzano il rilascio di citochine, la sopravvivenza cellulare e le risposte allo stress. MIF contribuisce anche all’omeostasi redox e può influenzare il controllo del ciclo cellulare e l’apoptosi, collegando segnali infiammatori a programmi cellulari più ampi. Una segnalazione di MIF deregolata è stata associata a malattie infiammatorie croniche, fenotipi autoimmuni e infiammazione associata ai tumori, rendendolo un bersaglio frequente per studi meccanicistici in immunologia e biologia del cancro.
MIF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MIF nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MIF. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MIF. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MIF interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.