MICA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418864-ACT

MICA (sequência A relacionada ao polipeptídeo do MHC de classe I) codifica uma glicoproteína de superfície celular induzível por estresse, que atua como ligante do receptor ativador NKG2D em células NK e em subconjuntos de células T CD8+. Ao se ligar ao NKG2D, a MICA contribui para vias de vigilância imune que detectam estresse celular, infecção e transformação, influenciando a ativação citotóxica e a sinalização de citocinas na sinapse imunológica. A expressão de MICA é modulada por respostas a dano no DNA, vias de choque térmico e sinalização inflamatória, e seu shedding (clivagem/liberação) ou a apresentação alterada na superfície pode modular o engajamento do receptor. A desregulação da sinalização MICA–NKG2D tem sido implicada na evasão imune tumoral, em estados inflamatórios crônicos e na ativação imune associada a doenças autoimunes.

MICA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MICA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MICA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MICA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MICA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MICA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MICA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MICA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MICA em células tumorais com expressão de MICA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.