MGMT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421647
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- MGMT O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico MGMT, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:MGMT Anticorpo (E-1): sc-166528
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
MGMT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421647 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Mouse Mgmt codifica a O-6-metilguanina-DNA metiltransferase (MGMT), uma enzima de reparo direto do DNA que remove adutos alquilados na posição O6 da guanina ao transferir a lesão para uma cisteína no sítio ativo, em uma reação “suicida” de uso único. Essa atividade contrabalança a mutagênese e o estresse de replicação decorrentes de danos alquilantes endógenos e ambientais, e se integra a programas de manutenção do genoma que influenciam o processamento pelo reparo de pareamento incorreto (mismatch repair) e a sinalização de checkpoints do ciclo celular. Alterações na função ou na expressão de MGMT são amplamente estudadas em contextos de instabilidade genômica induzida por alquilação e de biologia tumoral, nos quais a capacidade de reparo do DNA pode moldar os espectros de mutação e as respostas celulares ao estresse. Em camundongos, Mgmt oferece um sistema tratável para investigar vias de resposta a dano no DNA, a biologia do reparo específica de tecidos e mecanismos que ligam lesões por alquilação a modelos de carcinogênese e neurotoxicidade.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MGMT (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Mgmt em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Mgmt, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Mgmt na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MGMT.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Mgmt para a investigação da sinalização de MGMT, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Mgmt críticos para a função MGMT
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Mgmt para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo MGMT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo MGMT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Mgmt. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo MGMT Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR MGMT (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Mgmt para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Mgmt definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.