Mfn2/Mitofusin 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400536-ACT

MFN2 codifica a mitofusina 2 (Mfn2), uma GTPase do tipo dinamina inserida na membrana externa mitocondrial, que media a fusão mitocondrial e ajuda a manter uma rede mitocondrial conectada. A Mfn2 também contribui para o acoplamento entre mitocôndrias e retículo endoplasmático (RE), influenciando a transferência de Ca2+, a troca de lipídios, a bioenergética mitocondrial e a mitofagia, integrando assim a dinâmica mitocondrial às respostas celulares ao estresse. Por meio desses processos, a MFN2 afeta a eficiência da fosforilação oxidativa, a homeostase de espécies reativas de oxigênio e a sinalização relacionada à apoptose. A desregulação da função de MFN2 tem sido associada a fenótipos de neurodegeneração e neuropatia periférica, sendo frequentemente estudada em contextos de disfunção metabólica e de alterações no controle de qualidade de organelas.

Mfn2/Mitofusin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MFN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mfn2/Mitofusin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MFN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MFN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mfn2/Mitofusin 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MFN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mfn2/Mitofusin 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mfn2/Mitofusin 2 em células tumorais com expressão de MFN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.