Mfn1/Mitofusin 1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400637-NIC

MFN1 codifica a mitofusina 1 (Mfn1), uma GTPase do tipo dinamina inserida na membrana externa mitocondrial que medeia a fusão de mitocôndrias e contribui para a manutenção da arquitetura da rede mitocondrial. Por meio de homo- e hetero-oligomerização com a MFN2 e do acoplamento à fusão da membrana interna dependente de OPA1, a Mfn1 influencia a dinâmica mitocondrial, a organização das cristas e a produção bioenergética. A atividade de MFN1 interage com a mitofagia, a sinalização de apoptose e a regulação de contatos entre RE e mitocôndrias, moldando assim as respostas celulares ao estresse metabólico e ao controle de qualidade. Estudos mecanísticos têm implicado um desequilíbrio desregulado entre fusão e fissão mitocondrial envolvendo MFN1 em neurodegeneração, disfunção cardiometabólica e remodelamento metabólico associado ao câncer.

Mfn1/Mitofusin 1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus MFN1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de MFN1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função MFN1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com MFN1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.