Plasmide Double Nickase (h) Mfn1/Mitofusin 1: sc-400637-NIC

MFN1 code la mitofusine 1 (Mfn1), une GTPase de type dynamine ancrée dans la membrane externe mitochondriale, qui médiatise la fusion des mitochondries et contribue au maintien de l’architecture du réseau mitochondrial. Par homo‑ et hétéro‑oligomérisation avec MFN2 et en s’associant à la fusion de la membrane interne dépendante d’OPA1, Mfn1 influence la dynamique mitochondriale, l’organisation des crêtes et la production bioénergétique. L’activité de MFN1 interfère avec la mitophagie, la signalisation apoptotique et la régulation des contacts réticulum endoplasmique–mitochondries, modulant ainsi les réponses cellulaires au stress métabolique et aux mécanismes de contrôle qualité. Des études mécanistiques ont impliqué un déséquilibre de la fusion‑fission mitochondriale incluant MFN1 dans la neurodégénérescence, les dysfonctions cardiométaboliques et le remodelage métabolique associé aux cancers.

Mfn1/Mitofusin 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MFN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MFN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MFN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MFN1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.