MerTK CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401629-ACT

ヒトMERTKは受容体型チロシンキナーゼであるMerTKをコードしており、MerTKはTAMファミリーの一員として、GAS6やPROS1などのリガンドを介してアポトーシス細胞上のホスファチジルセリンを認識し、エフェロサイトーシス（死細胞の貪食）と炎症の収束を促進します。MerTKシグナルはPI3K–AKT、MAPK/ERK、STAT経路を介して、マクロファージおよびミクログリアの恒常性維持プログラムを協調的に制御し、自然免疫の過剰な活性化を抑制するとともに、細胞の生存や遊走にも影響します。腫瘍微小環境では、MerTK依存的なクリアランスと免疫調節性シグナルがサイトカイン産生や抗原提示細胞の機能を左右しうる一方、神経系ではミクログリアの貪食活性や組織リモデリングに寄与します。MERTKの発現やシグナル伝達の制御異常は、がん研究および神経炎症を中心とする研究領域において、炎症トーンの変化や異常な貪食と関連づけられています。

MerTK CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MERTKの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MerTK CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MERTK 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMERTK転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MerTKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMERTK遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMerTK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMERTK発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMerTK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。