Plásmido CRISPR de Activación (h) Mer: sc-402654-ACT

El gen humano RYK (relacionado con la tirosina cinasa) codifica una proteína tipo receptor tirosina cinasa con actividad catalítica reducida, que funciona como correceptor en la señalización Wnt, en particular dentro de las vías Wnt no canónicas/de polaridad planar celular. Mediante interacciones con el ligando WNT5A y señales relacionadas, RYK modula la dinámica del citoesqueleto, la polaridad celular y el comportamiento migratorio, influyendo en el patrón tisular y en programas de guía neuronal. La alteración de la expresión de RYK o de su salida de señalización se ha asociado con procesos del desarrollo desregulados y con fenotipos relevantes para la invasión oncogénica y la biología de la metástasis. Estas propiedades hacen de RYK un nodo útil para diseccionar el cableado específico del contexto de la vía Wnt y las transiciones de estado celular en modelos de células humanas.

RYK El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RYK sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RYK El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RYK en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RYK, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RYK. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RYK y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RYK en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RYK en células tumorales con expresión de RYK silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.