Mer CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402654-ACT

ヒトRYK（related to tyrosine kinase）遺伝子は、触媒活性が低下した受容体型チロシンキナーゼ様タンパク質をコードしており、Wntシグナル伝達において、特に非カノニカルWnt／平面細胞極性（PCP）経路で共受容体として機能します。WNT5Aなどのリガンドや関連するシグナルとの相互作用を介して、RYKは細胞骨格ダイナミクス、細胞極性、遊走挙動を調節し、組織パターニングや神経誘導プログラムに影響を与えます。RYKの発現やシグナル出力の変化は、発生過程の制御不全や、がんの浸潤・転移生物学に関連する表現型と結び付けられています。これらの特性により、RYKはヒト細胞モデルにおける文脈依存的なWnt経路の配線や細胞状態遷移を解析するための有用な節点となります。

RYK CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RYKの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RYK CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RYK 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRYK転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RYKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRYK遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRYK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRYK発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRYK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。