MEIG1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418750-ACT

MEIG1 (gene 1 expresso na meiose) codifica uma pequena proteína enriquecida em células germinativas, implicada na espermatogénese e na progressão meiótica, com funções descritas na regulação da expressão génica pós-transcricional durante a diferenciação das células germinativas masculinas. No testículo, o MEIG1 tem sido associado à montagem e ao transporte de complexos proteicos necessários para a espermiogénese, apoiando processos como o tráfego de carga associado à manchete e o desenvolvimento do flagelo. A desregulação de vias associadas ao MEIG1 é relevante para estudos de infertilidade masculina e de morfogénese espermática defeituosa, e o seu perfil de expressão restrito torna-o útil para dissecar programas regulatórios específicos da linhagem germinativa. Em sistemas humanos, o MEIG1 serve como um nó acessível para investigar redes transcricionais e pós-transcricionais que coordenam a meiose e a maturação dos espermatozoides.

MEIG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MEIG1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MEIG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MEIG1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MEIG1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MEIG1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MEIG1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MEIG1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MEIG1 em células tumorais com expressão de MEIG1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.