MDR3/ABCB4 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404167-LAC

ABCB4 (MDR3) codifica un trasportatore canalicolare epatocitario della famiglia ABC (ATP-binding cassette) che trasloca la fosfatidilcolina dal foglietto interno a quello esterno della membrana canalicolare, per la secrezione nella bile. Fornendo fosfolipidi che formano micelle miste con gli acidi biliari, MDR3 sostiene la formazione della bile, la protezione di membrana e l’omeostasi lipidica epatobiliare all’interno delle vie di trasporto degli acidi biliari e del traffico lipidico. La perdita o la riduzione dell’attività di ABCB4 è associata a fenotipi epatici colestatici e a una composizione biliare alterata, rendendolo rilevante per studi sul danno indotto dagli acidi biliari, sulla segnalazione infiammatoria e sulla regolazione delle reti di trasportatori. ABCB4 è quindi ampiamente utilizzato come modello per indagare la dinamica della membrana canalicolare e il cross-talk con altri trasportatori epatici.

Le particelle di attivazione lentivirale MDR3/ABCB4 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ABCB4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MDR3/ABCB4 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ABCB4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MDR3/ABCB4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ABCB4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.