MCM8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-413655
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MCM8 CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（h）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してMCM8ゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MCM8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h) | sc-413655 | 20 µg | $397.00 |
概要
MCM8は保存性の高いミニクロモソーム維持（MCM）タンパク質をコードしており、MCM9と機能的複合体を形成して、DNA複製の完了および相同組換え（HR）を介した修復を促進します。とりわけ複製ストレスからの回復過程において重要です。MCM8はDNA末端切除や、停止あるいは崩壊した複製フォークの処理に関与し、S期を通じたゲノム安定性の維持や減数分裂期の組換えといった文脈とも関連します。MCM8機能の破綻は、二本鎖切断修復の障害、染色体不安定性の増大、ならびに複製に伴うDNA損傷への感受性亢進と関連づけられています。MCM8の遺伝学的変化は不妊症や早発卵巣不全で報告されており、DNA修復経路の欠陥により駆動される腫瘍形成の機序研究においても重要です。
MCM8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMCM8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MCM8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MCM8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MCM8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、MCM8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MCM8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- MCM8の機能に不可欠なMCM8エクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、MCM8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- MCM8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMCM8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MCM8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
MCM8 HDRプラスミド（h）および MCM8 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMCM8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMCM8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。