MCM2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400959

Panoramica

MCM2 (minichromosome maintenance complex component 2) è un’ATPasi essenziale di tipo AAA+ all’interno dell’elicasi MCM2–7, che abilita (licensing) le origini di replicazione e guida lo svolgimento del DNA durante la fase S. Coordinando l’attivazione delle origini, la progressione delle forcelle di replicazione e le risposte dei checkpoint, MCM2 contribuisce a mantenere la stabilità del genoma e a supportare un ordinato avanzamento del ciclo cellulare attraverso la transizione G1/S. Un’espressione deregolata di MCM2 o un’alterazione del licensing replicativo può contribuire a stress replicativo, attivazione della segnalazione di danno al DNA e instabilità cromosomica, processi spesso studiati nella biologia del cancro e nei disordini proliferativi. In quanto fattore centrale del replisoma, MCM2 viene anche studiata nel contesto delle vie di stress replicativo dipendenti da ATR/CHK1 e delle risposte a perturbazioni genotossiche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MCM2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MCM2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MCM2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MCM2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MCM2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MCM2 per lo studio della segnalazione di MCM2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MCM2 critici per la funzione di MCM2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MCM2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MCM2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MCM2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MCM2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MCM2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MCM2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MCM2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MCM2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.