Mcl-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400079-LAC

O MCL1 codifica a Mcl-1, uma proteína antiapoptótica da família BCL-2 que se localiza principalmente na membrana externa mitocondrial e restringe a permeabilização dessa membrana ao sequestrar fatores pró-morte do tipo BH3-only e inibir a ativação de BAX/BAK. Sua abundância é rigidamente controlada por sinalização de fatores de crescimento e por estresse celular, por meio de programas transcricionais e de rápida degradação proteassomal, posicionando a Mcl-1 como um nó central que integra sinais de sobrevivência com a apoptose intrínseca. O MCL1 interage com vias como PI3K/AKT, MAPK/ERK e respostas integradas ao estresse, que modulam decisões de destino celular sob estresse metabólico, genotóxico ou do retículo endoplasmático. A expressão desregulada e a dependência de MCL1 são frequentemente investigadas em modelos de câncer e de neoplasias hematológicas, e a alteração do “priming” apoptótico envolvendo a Mcl-1 também é relevante em estudos de homeostase imune e de biologia de lesão tecidual.

As Partículas de Ativação Lentivirais Mcl-1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de MCL1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Mcl-1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição MCL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Mcl-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo MCL1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.