Mcl-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400079-ACT

MCL1 codifica a Mcl-1, uma proteína antiapoptótica da família BCL-2 que se localiza principalmente na membrana externa da mitocôndria e suprime a permeabilização da membrana externa mitocondrial ao sequestrar fatores pró-apoptóticos do tipo BH3-only e inibir a ativação de BAX/BAK. A sua abundância é rigidamente regulada por rápida degradação e por sinais de vias como PI3K–AKT, MAPK/ERK e JAK/STAT, permitindo um controlo dinâmico da apoptose intrínseca durante a proliferação, a diferenciação e as respostas celulares ao stress. A Mcl-1 também contribui para a homeostase mitocondrial e tem sido associada à regulação da autofagia e da adaptação metabólica. A expressão desregulada de MCL1 é frequentemente associada a programas de sobrevivência celular alterados no cancro e influencia a resistência a agressões genotóxicas e a perturbações dirigidas, tornando-a um nó-chave para o estudo da apoptose, da sinalização de stress e das dependências de sobrevivência.

Mcl-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MCL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mcl-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MCL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MCL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mcl-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MCL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mcl-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mcl-1 em células tumorais com expressão de MCL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.