MCAD CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402708-ACT

ACADMは、ヒトの中鎖アシルCoAデヒドロゲナーゼ（MCAD）をコードしており、MCADはミトコンドリアに局在するフラボタンパク質として、中鎖脂肪酸アシルCoAのβ酸化における最初の脱水素化反応を触媒します。MCAD活性は、飢餓時や代謝ストレス下で脂肪酸分解を効率よく進めることで細胞のエネルギーホメオスタシスを支え、ミトコンドリアの酸化還元バランスとATP産生を結び付けます。ACADMの機能障害や発現低下は、中鎖脂肪酸の酸化不全および特徴的なアシルカルニチン蓄積パターンと関連し、これらは代謝研究で広く利用されています。そのため、ACADM/MCADは、ミトコンドリア機能、脂質利用、栄養応答性の転写プログラムを制御する経路において、しばしば研究対象となっています。

MCAD CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ACADMの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MCAD CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ACADM 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はACADM転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MCADの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のACADM遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMCAD依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびACADM発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMCAD経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。