MC1-R Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421583

Panoramica

Mc1r codifica il recettore della melanocortina 1 (MC1-R), un recettore accoppiato a proteine G espresso in modo prominente nei melanociti, dove regola la pigmentazione accoppiandosi a Gs e stimolando la segnalazione cAMP/PKA. L’attivazione di MC1-R influenza il bilanciamento tra la sintesi di eumelanina e feomelanina attraverso effettori a valle, tra cui CREB ed enzimi melanogenici, integrando segnali ormonali come l’α-MSH e l’antagonismo esercitato dalla proteina di segnalazione agouti. Nei modelli murini, un’attività alterata di Mc1r modula i fenotipi del colore del mantello e si intreccia con vie che controllano le risposte allo stress ossidativo e la gestione del danno indotto dai raggi UV nelle cellule pigmentarie. Poiché la segnalazione melanocortinica interagisce con MAPK e con programmi trascrizionali che governano la differenziazione dei melanociti, la perturbazione di Mc1r è utile per studiare la biologia delle cellule pigmentarie, il crosstalk di segnalazione legato all’infiammazione e la mappatura dal genotipo al fenotipo in contesti di ricerca dermatologica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MC1-R (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mc1r in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mc1r insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mc1r a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MC1-R.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mc1r per lo studio della segnalazione di MC1-R, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mc1r critici per la funzione di MC1-R
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mc1r per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MC1-R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MC1-R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mc1r. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MC1-R Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MC1-R (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mc1r per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mc1r definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.