MAT IIα Plasmide Double Nickase (h): sc-402566-NIC

MAT2A codifica la subunità catalitica α della metionina adenosiltransferasi II (MAT IIα), che sintetizza la S-adenosil-L-metionina (SAM), il principale donatore di gruppi metile per le reazioni di metilazione di DNA, RNA e istoni. Controllando la disponibilità intracellulare di SAM, MAT IIα collega il ciclo della metionina e il metabolismo a un carbonio alla regolazione epigenetica, alla biosintesi delle poliamine e all’equilibrio redox tramite la transulfurazione. L’attività di MAT2A è strettamente associata ai programmi proliferativi e agli stati di sensing dei nutrienti, rendendola rilevante per studi sull’adattamento metabolico e sulla regolazione genica dipendente dalla cromatina. Alterazioni dell’espressione o della dipendenza da MAT2A sono state riportate in diversi contesti patologici, inclusi il metabolismo tumorale e la fisiopatologia epatica, a supporto del suo impiego come strumento molecolare per interrogare fenotipi guidati dalla metilazione.

MAT IIα Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MAT2A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MAT2A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MAT2A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MAT2A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.