MAT IIα Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402566-ACT

MAT2A codifica la subunità alfa catalitica della metionina adenosiltransferasi II (MAT IIα), un enzima chiave che genera S-adenosilmetionina (SAM), il principale donatore di gruppi metilici per la metilazione di DNA, RNA e istoni, oltre che per altre reazioni dipendenti dalle metiltransferasi. Controllando la disponibilità di SAM, MAT IIα collega il metabolismo a un carbonio e il ciclo della metionina alla regolazione epigenetica, allo stato della cromatina e ai programmi trascrizionali che influenzano proliferazione, differenziamento e risposte allo stress. L’attività di MAT2A è strettamente accoppiata allo stato nutrizionale e all’equilibrio redox cellulare, integrando segnali metabolici con una segnalazione dipendente dalla metilazione. La disregolazione di MAT2A e dell’omeostasi della SAM è stata associata ad alterazioni del paesaggio epigenetico e all’adattamento metabolico in contesti rilevanti per la malattia, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici sulla metilazione e sul crosstalk tra metabolismo ed epigenetica.

MAT IIα Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAT2A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MAT IIα Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAT2A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAT2A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MAT IIα. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAT2A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MAT IIα nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MAT IIα nelle cellule tumorali con espressione di MAT2A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.