Mast Cell Tryptase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400887

Descripción general

TPSAB1 codifica la triptasa de los mastocitos, una proteasa de serina secretada que se almacena en gránulos citoplasmáticos y se libera durante la desgranulación de los mastocitos. La triptasa mastocitaria contribuye a la remodelación proteolítica de la matriz extracelular, la modulación de la señalización de citocinas y quimiocinas, y la activación de receptores activados por proteasas, configurando programas de inflamación y reparación tisular. Su actividad se asocia a procesos impulsados por mastocitos como la permeabilidad vascular, el reclutamiento de leucocitos y la reactividad de las vías respiratorias, con relevancia para la inflamación alérgica y otros trastornos mediados por el sistema inmunitario. Como proteasa asociada a gránulos, la triptasa mastocitaria también se utiliza como marcador molecular para estudiar la abundancia de mastocitos, su estado de activación y sus funciones efectoras en tejidos humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Mast Cell Tryptase (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TPSAB1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TPSAB1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TPSAB1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Mast Cell Tryptase.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TPSAB1 para la investigación de la señalización de Mast Cell Tryptase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TPSAB1 críticos para la función de Mast Cell Tryptase
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TPSAB1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Mast Cell Tryptase CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Mast Cell Tryptase CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TPSAB1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Mast Cell Tryptase (h) y el plásmido HDR Mast Cell Tryptase (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TPSAB1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TPSAB1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.