Mast Cell Tryptase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400887

Panoramica

TPSAB1 codifica la triptasi dei mastociti, una proteasi serinica secreta, immagazzinata in granuli citoplasmatici e rilasciata durante la degranulazione dei mastociti. La triptasi dei mastociti contribuisce al rimodellamento proteolitico della matrice extracellulare, alla modulazione della segnalazione di citochine e chemochine e all’attivazione dei recettori attivati da proteasi, plasmando i programmi di infiammazione e riparazione tissutale. La sua attività è collegata a processi guidati dai mastociti quali permeabilità vascolare, reclutamento leucocitario e reattività delle vie aeree, con rilevanza per l’infiammazione allergica e altri disturbi immunomediati. In quanto proteasi associata ai granuli, la triptasi dei mastociti è anche utilizzata come marcatore molecolare per studiare l’abbondanza dei mastociti, il loro stato di attivazione e le funzioni effettrici nei tessuti umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Mast Cell Tryptase (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TPSAB1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TPSAB1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TPSAB1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Mast Cell Tryptase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TPSAB1 per lo studio della segnalazione di Mast Cell Tryptase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TPSAB1 critici per la funzione di Mast Cell Tryptase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TPSAB1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Mast Cell Tryptase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Mast Cell Tryptase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TPSAB1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Mast Cell Tryptase Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Mast Cell Tryptase (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TPSAB1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TPSAB1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.