MARCO CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402692-ACT

ヒトMARCO（macrophage receptor with collagenous structure：コラーゲン様構造を有するマクロファージ受容体）はクラスAスカベンジャー受容体の一種で、主にマクロファージおよび一部の特化した樹状細胞サブセットに発現しています。細菌由来成分や環境中の粒子を含む、広範なポリアニオン性リガンドの結合と取り込みを仲介します。非オプソニン依存性の貪食や粒子の取り込みを促進することで、MARCOは自然免疫の監視、抗原の取り扱い、ならびにパターン認識経路下流の炎症性シグナル伝達の調節に寄与します。MARCOの発現や活性の変化は、骨髄系細胞の活性化異常や組織炎症と関連するとされ、肺における免疫応答、感染生物学、腫瘍随伴マクロファージの表現型といった文脈で頻繁に研究されています。骨髄系細胞と微小環境の相互作用を規定する細胞表面受容体として、MARCOは宿主—病原体相互作用、免疫細胞のトラフィッキング、炎症性リモデリングの研究において重要です。

MARCO CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MARCOの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MARCO CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MARCO 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMARCO転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MARCOの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMARCO遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMARCO依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMARCO発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMARCO経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。