MARCH8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405928

Panoramica

MARCH8 (membrane associated ring-CH-type finger 8) codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina che si localizza nei compartimenti endosomiali e della membrana plasmatica e regola il turnover e il traffico di numerose proteine di membrana in modo dipendente dall’ubiquitinazione. Controllando l’endocitosi, l’instradamento ai lisosomi e la disponibilità sulla superficie di recettori e trasportatori, MARCH8 influenza la presentazione dell’antigene, la segnalazione immunitaria e le vie di controllo qualità delle proteine di membrana. La sua attività è stata collegata alla modulazione dell’incorporazione delle glicoproteine dell’envelope virale e alla limitazione dell’infettività delle particelle virali, evidenziando un ruolo all’interfaccia tra difesa dell’ospite e biologia delle membrane. Programmi di traffico mediati dall’ubiquitina che coinvolgono MARCH8, quando disregolati, sono rilevanti per lo studio della disfunzione immunitaria e delle interazioni patogeno–ospite nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MARCH8 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MARCH8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MARCH8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MARCH8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MARCH8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MARCH8 per lo studio della segnalazione di MARCH8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MARCH8 critici per la funzione di MARCH8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MARCH8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MARCH8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MARCH8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MARCH8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MARCH8 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MARCH8 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MARCH8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MARCH8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.