MAN2C1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404066

概要

MAN2C1 は、糖タンパク質の代謝回転および品質管理の過程で生じる遊離 N 型糖鎖の分解（カタボリズム）における主要酵素である、細胞質型 α-マンノシダーゼ 2C1 をコードします。MAN2C1 はオリゴ糖からマンノース残基をトリミングすることで、ER 関連分解（ERAD）に隣接した糖鎖プロセシングを支え、細胞のプロテオスタシスと糖質代謝に寄与します。N 型糖鎖の取り扱い異常や糖タンパク質恒常性の破綻は、さまざまな疾患状況においてシグナル伝達の破綻や代謝適応の異常と関連づけられており、MAN2C1 は細胞状態の糖鎖依存的な制御を研究するうえで重要な結節点となります。ヒト細胞では、MAN2C1 を摂動させることで、細胞質における糖鎖プロセシングがストレス応答、リソソーム–ER 間クロストーク、ならびに糖タンパク質由来のシグナル伝達ネットワークにどのように影響するかを検証できます。

MAN2C1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMAN2C1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MAN2C1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MAN2C1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MAN2C1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MAN2C1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MAN2C1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MAN2C1の機能に不可欠なMAN2C1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MAN2C1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MAN2C1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMAN2C1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MAN2C1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MAN2C1 HDRプラスミド（h）および MAN2C1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMAN2C1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMAN2C1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。