MAN2C1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404066-ACT

O gene humano **MAN2C1** codifica a **α-manosidase citosólica 2C1**, uma glicosidase que catalisa o aparo de resíduos de manose **α-1,2/α-1,3/α-1,6** de oligossacarídeos livres liberados durante o turnover de **N-glicoproteínas**. Ao participar do catabolismo citosólico de oligossacarídeos livres e de processos de controle de qualidade de glicanos ligados à degradação associada ao retículo endoplasmático (**ERAD**), o **MAN2C1** ajuda a regular a proteostase celular e a homeostase de carboidratos. Alterações na atividade de **MAN2C1** podem perturbar o processamento de glicanos e vias responsivas ao estresse, tornando-o relevante para estudos de remodelação metabólica, controle de qualidade de proteínas e fenótipos associados à glicosilação observados em diversos contextos de doença.

MAN2C1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAN2C1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MAN2C1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAN2C1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAN2C1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MAN2C1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAN2C1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MAN2C1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MAN2C1 em células tumorais com expressão de MAN2C1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.