MALL CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406302

概要

MAL様（MALL）は、コレステロールおよびスフィンゴ脂質に富む膜マイクロドメインに集積する4回膜貫通型タンパク質をコードしており、上皮細胞における頂端側（アピカル）輸送や膜コンパートメント化の組織化に寄与します。脂質ラフトの構造に及ぼす影響を介して、MALLはエンドサイトーシス後のリサイクリング、小胞輸送、ならびに形質膜上におけるシグナル伝達複合体の空間的分布に影響し得ます。MALLの発現変化は複数の腫瘍種で観察されており、上皮分化状態、細胞極性、そしてマイクロドメイン依存的なシグナル伝達挙動との関連で研究されています。これらの特性により、MALLはヒト細胞モデルにおいて、増殖・接着・受容体ダイナミクスを調節する膜組織化機構の解明に有用な標的となります。

MALL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMALL遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MALL内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MALLのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MALLタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MALLシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MALL欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MALLの機能に不可欠なMALLエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MALLゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MALL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMALL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MALL遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MALL HDRプラスミド（h）および MALL HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMALLホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMALL標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。