Plasmide Double Nickase (h2) MAL: sc-403024-NIC-2

Le gène humain MAL code la protéine de la myéline et des lymphocytes (MAL), un composant membranaire tétraspan hautement hydrophobe, enrichi dans des microdomaines membranaires riches en glycolipides et en cholestérol, qui contribue à l’organisation du tri apical et du trafic vésiculaire dans les épithéliums polarisés et participe à l’organisation des protéolipides dans les cellules myélinisantes. MAL intervient dans des processus de transport dépendants des radeaux lipidiques et influence le recyclage endocytique ainsi que la compartimentation des signaux, ce qui l’associe au maintien de la polarité épithéliale et à la formation de domaines membranaires spécialisés. Une expression altérée de MAL ou son silence épigénétique ont été rapportés dans de nombreux cancers ainsi que dans des contextes de démyélinisation et de fonction des cellules immunitaires, ce qui en fait un marqueur utile pour étudier la différenciation de lignée, les défauts de trafic membranaire et la biologie tumorale. L’édition génétique de MAL permet d’explorer les mécanismes des voies de transport associées aux radeaux lipidiques, la régulation de la polarité cellulaire et les effets dépendants du contexte sur la prolifération, la migration et la dynamique membranaire liée à la myéline dans des systèmes modèles humains.

MAL Le plasmide double nickase (h2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MAL dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MAL. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MAL. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MAL.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.