MAGI-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402283-ACT

MAGI1 codifica a MAGI-1, uma proteína de ancoragem do tipo guanilato-quinase associada à membrana (MAGUK), enriquecida em junções apertadas (tight junctions) e em locais sinápticos, onde coordena complexos multiproteicos que moldam a polaridade epitelial e a adesão célula–célula. Por meio de interações mediadas por domínios PDZ com componentes juncionais e adaptadores de sinalização, a MAGI-1 ajuda a organizar vias que governam a integridade da barreira, a dinâmica do citoesqueleto e a transdução de sinais associada a receptores, incluindo comunicação cruzada (cross-talk) com PI3K/AKT e redes relacionadas de fosfatases. Alterações na expressão de MAGI1 ou sua deslocalização nas junções têm sido associadas à ruptura da arquitetura tecidual e a programas de remodelamento relevantes para a biologia do câncer, inflamação e fenótipos associados à metástase. Essas características tornam MAGI1 um nó útil para estudar como arcabouços (scaffolds) juncionais integram a sinalização com a manutenção estrutural em células humanas.

MAGI-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAGI1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MAGI-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAGI1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAGI1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MAGI-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAGI1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MAGI-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MAGI-1 em células tumorais com expressão de MAGI1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.