MAGE-A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401056-ACT

O gene humano **MAGEA1** codifica a **MAGE-A1**, um antígeno câncer/testículo da família de antígenos associados ao melanoma (MAGE), cuja expressão normalmente é restrita às células germinativas, mas que pode ser reexpressa de forma aberrante em múltiplos contextos tumorais. A MAGE-A1 participa da homeostase proteica e da regulação transcricional por meio de interações com ligases E3 de ubiquitina e outros parceiros regulatórios, influenciando a degradação dependente de ubiquitina e programas de sinalização a jusante. Sua expressão desregulada está associada a alterações na apresentação de antígenos e nas características de reconhecimento imune de células malignas, sendo amplamente utilizada como marcador molecular de expressão gênica associada a tumores. O estudo da MAGE-A1 dá suporte a investigações mecanísticas de des-repressão epigenética, circuitos de resposta ao estresse e contribuições da via ubiquitina–proteassoma para fenótipos relevantes para doenças.

MAGE-A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAGEA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MAGE-A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAGEA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAGEA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MAGE-A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAGEA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MAGE-A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MAGE-A1 em células tumorais com expressão de MAGEA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.