MafB CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-421335-ACT-2

マウスMafbはMafB転写因子をコードしており、MafBは塩基性ロイシンジッパー（bZIP）型タンパク質として、配列特異的な遺伝子発現制御を介して、マクロファージ／単球、膵内分泌細胞、ならびに発生過程の腎ポドサイトにおける系譜決定と終末分化を調節する。MafBは発生シグナルや免疫シグナル経路の下流に位置する転写・エピジェネティックプログラムの一部として機能し、マクロファージの極性化、サイトカイン応答性ネットワーク、ポドサイトの構造維持および濾過バリアの完全性に影響を与える。Mafb活性の制御異常は免疫恒常性の変化や器官形成の欠陥と関連づけられており、MafB発現の変動は糸球体障害、糖尿病に伴う膵島機能不全、炎症性ストレスのモデルでしばしば解析される。マウスにおけるMafbの遺伝子編集は、in vivoモデル、初代細胞、分化させた幹細胞系を用いて、転写回路の機序、細胞運命決定、組織特異的病態を検討するためのメカニズム研究を可能にする。

MafB CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Mafbの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MafB CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Mafb 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMafb転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MafBの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMafb遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMafB依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMafb発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMafB経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。