MafB CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400554-ACT

MAFBは、大型Mafファミリーに属するbZIP型転写因子MafBをコードしており、Maf認識配列（MARE）に結合して系統特異的な転写プログラムを制御します。ヒト組織では、骨髄系細胞およびマクロファージの分化、炎症関連遺伝子発現の調節、さらに腎糸球体ポドサイトの同一性維持や膵島機能などの特殊化した細胞状態の維持における主要な制御因子です。MafBは発生過程およびストレス応答性経路からのシグナルを統合し、最終分化、細胞成熟、ならびに組織恒常性を協調的に制御します。MAFBの発現または活性の異常は、免疫・炎症表現型、腎糸球体機能障害、そしてがん生物学に関連する細胞分化プログラムの変化と関連づけられています。

MafB CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAFBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MafB CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAFB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAFB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MafBの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAFB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMafB依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAFB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMafB経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。