MafB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400554-ACT

MAFB codifica MafB, um fator de transcrição bZIP da família Maf (grande Maf) que se liga a elementos de reconhecimento Maf para controlar programas de transcrição específicos de linhagem. Em tecidos humanos, é um regulador-chave da diferenciação mieloide e de macrófagos, da modulação da expressão de genes inflamatórios e da manutenção de estados celulares especializados, incluindo a identidade de podócitos renais e a função das ilhotas pancreáticas. MafB integra sinais de vias de desenvolvimento e de resposta ao estresse para coordenar a diferenciação terminal, a maturação celular e a homeostase tecidual. A expressão ou atividade desregulada de MAFB tem sido associada a fenótipos imunes e inflamatórios, disfunção glomerular renal e programas alterados de diferenciação celular relevantes para a biologia do câncer.

MafB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAFB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MafB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAFB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAFB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MafB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAFB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MafB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MafB em células tumorais com expressão de MAFB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.