MAD2B Plasmide Double Nickase (h2): sc-404007-NIC-2

Il gene umano MAD2L2 codifica MAD2B (noto anche come REV7), una proteina con dominio HORMA che regola la stabilità del genoma partecipando alla sintesi del DNA per bypasso delle lesioni (translesion DNA synthesis) tramite la DNA polimerasi ζ e coordinando la tolleranza al danno del DNA durante lo stress replicativo. MAD2B agisce anche all’interno del complesso Shieldin influenzando la scelta della via nella riparazione delle rotture a doppio filamento, promuovendo il non-homologous end joining (NHEJ) e limitando la resezione delle estremità del DNA, modellando così le risposte cellulari agli insulti genotossici. Attraverso questi ruoli, MAD2L2 incide sul controllo dei checkpoint, sulla riparazione associata alla replicazione e sul reclutamento di fattori di riparazione associati alla cromatina, processi spesso alterati nel cancro e in altri disturbi legati a difetti di riparazione del DNA. Gli strumenti di ricerca su MAD2L2/MAD2B supportano studi meccanicistici della mutagenesi, la mappatura di interazioni di letalità sintetica e l’analisi funzionale del bias delle vie di riparazione in esperimenti di gene editing e in saggi di mantenimento del genoma.

MAD2B Il plasmide Double Nickase (h2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MAD2L2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MAD2L2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MAD2L2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MAD2L2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.