mAChR M1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401453-NIC

CHRM1は、ヒトのムスカリン性アセチルコリン受容体M1（mAChR M1）をコードする遺伝子であり、主にGq/11を介してシグナルを伝達するGタンパク質共役受容体（GPCR）です。これによりホスホリパーゼCβが活性化され、細胞内Ca²⁺濃度が上昇し、PKC依存性の転写プログラムが促進されます。mAChR M1は、神経の興奮性、シナプス可塑性、大脳皮質および海馬回路におけるコリン作動性調節を担い、さらに末梢の平滑筋や分泌組織でも役割を果たします。下流ではMAPK/ERKやPI3K関連シグナルが動員され、CHRM1の活性は遺伝子発現、細胞代謝、受容体の脱感作／内在化ダイナミクスの変化と結び付きます。CHRM1を含むコリン作動性シグナルの破綻は、認知機能および神経精神症状の表現型との関連で研究されているほか、疾患関連の細胞モデルで観察されるGPCR経路のより広範な変化の文脈でも検討されています。

mAChR M1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHRM1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHRM1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHRM1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHRM1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。