M-cadherin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401232-ACT

CDH15 codifica a M-caderina, um recetor de adesão célula–célula dependente de cálcio, enriquecido em células da linhagem do músculo esquelético e envolvido no reconhecimento, fusão de mioblastos e na manutenção da arquitetura tecidular. Por meio de adesão homofílica e do acoplamento às cateninas, a M-caderina sustenta a formação de junções aderentes, a organização do citoesqueleto e a sinalização dependente de contacto que influencia a diferenciação e as respostas regenerativas. A atividade de CDH15 cruza-se com vias que regulam a migração celular e a dinâmica de membrana durante a miogénese, e foi descrita expressão alterada em contextos de degeneração/regeneração muscular e de fenótipos de adesão em células tumorais. Estas características tornam o CDH15 um alvo útil para estudar a regulação dependente de adesão do compromisso de linhagem e da remodelação tecidular em modelos celulares humanos.

M-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDH15 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

M-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDH15 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDH15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de M-cadherin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDH15 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de M-cadherin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via M-cadherin em células tumorais com expressão de CDH15 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.