Ly6G6d CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403030-ACT

LY6G6Dは、Ly6/uPARファミリーに属するGPI（グリコシルホスファチジルイノシトール）アンカー型タンパク質Ly6G6dをコードしており、免疫関連の状況で高く発現し、細胞膜上での細胞間相互作用に影響すると考えられています。細胞表面関連タンパク質として、Ly6G6dは、炎症性および腫瘍関連微小環境におけるシグナル伝達の形成、膜マイクロドメインの組織化、免疫細胞間コミュニケーションに関わる役割について研究されています。LY6G6Dの発現変化は複数のがんおよび免疫腫瘍学データセットで報告されており、免疫浸潤や上皮—免疫クロストークの研究における分子マーカーとしての利用を支持しています。これらの特徴により、LY6G6Dは、表面抗原制御を免疫シグナルや疾患関連の転写プログラムへと結び付ける経路を解明するための重要な標的となります。

Ly6G6d CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LY6G6Dの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ly6G6d CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LY6G6D 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLY6G6D転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ly6G6dの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLY6G6D遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLy6G6d依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLY6G6D発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLy6G6d経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。