LRRC8D Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406426

Visão geral

LRRC8D codifica uma subunidade contendo repetições ricas em leucina do canal aniônico regulado por volume (VRAC), um complexo heteromérico que medeia o fluxo de ânions ativado por inchaço celular e contribui para a homeostase do volume celular. Complexos de VRAC que contêm LRRC8D influenciam o transporte de osmolitos e pequenos ânions e podem modular o equilíbrio redox e as respostas ao estresse celular, conectando-se a processos como proliferação, apoptose e sinalização inflamatória. Em tecidos imunes e de barreira, a composição do VRAC, incluindo LRRC8D, tem sido associada à regulação do manejo de espécies reativas de oxigênio e de saídas de sinalização dependentes de estímulos. A atividade desregulada do VRAC e padrões alterados de expressão das subunidades LRRC8 têm sido investigados em contextos como biologia do câncer, estresse metabólico e fisiopatologia mediada pelo sistema imune, nos quais vias de transporte iônico e de estresse oxidativo frequentemente são remodeladas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO LRRC8D (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene LRRC8D em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do LRRC8D, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do LRRC8D na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína LRRC8D.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de LRRC8D para a investigação da sinalização de LRRC8D, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) LRRC8D críticos para a função LRRC8D
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos LRRC8D para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo LRRC8D Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo LRRC8D Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus LRRC8D. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo LRRC8D Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR LRRC8D (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia LRRC8D para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo LRRC8D definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.