LRRC50 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407107

Panoramica

DNAAF1 (LRRC50) codifica una proteina con ripetizioni ricche in leucina, necessaria per la pre-assemblaggio citoplasmatico dei bracci di dineina assonemali, una fase chiave della biogenesi delle ciglia motili. Supporta la maturazione e il traffico del complesso motorio della dineina prima della sua incorporazione nell’assonema, regolando così il battito ciliare e la clearance mucociliare. L’alterazione di DNAAF1 compromette la formazione dei bracci di dineina esterni e interni e riduce il flusso di liquidi guidato dalle ciglia. Varianti patogene sono associate alla discinesia ciliare primaria con difetti di lateralità, rendendo DNAAF1 un bersaglio rilevante per lo studio delle ciliopatie e dei programmi di sviluppo dipendenti dalle ciglia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LRRC50 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DNAAF1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DNAAF1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DNAAF1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LRRC50.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DNAAF1 per lo studio della segnalazione di LRRC50, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DNAAF1 critici per la funzione di LRRC50
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DNAAF1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LRRC50 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LRRC50 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DNAAF1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LRRC50 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LRRC50 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DNAAF1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DNAAF1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.