LRRC50 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407107

概要

DNAAF1（LRRC50）は、運動性線毛の形成における重要な段階である軸糸ダイニン腕の細胞質内プレアセンブリに必須のロイシンリッチリピートタンパク質をコードします。軸糸へ組み込まれる前のダイニンモーター複合体の成熟と輸送を支え、その結果として線毛拍動と粘液線毛クリアランスを制御します。DNAAF1の機能が損なわれると外腕・内腕ダイニンの形成が障害され、線毛による液体流動が低下します。病的バリアントは左右軸異常を伴う原発性線毛運動不全症（PCD）と関連しており、DNAAF1は線毛病や線毛依存的な発生プログラムの研究において重要な標的となります。

LRRC50 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDNAAF1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DNAAF1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DNAAF1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、LRRC50タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、LRRC50シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DNAAF1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• LRRC50の機能に不可欠なDNAAF1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DNAAF1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• LRRC50 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびLRRC50 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DNAAF1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  LRRC50 HDRプラスミド（h）および LRRC50 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDNAAF1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDNAAF1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。