LRP6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421466-ACT

O gene Lrp6 de camundongo codifica a proteína 6 relacionada ao receptor de LDL (LRP6), um co-receptor transmembranar de passagem única essencial para a sinalização canônica Wnt/β-catenina. Após a ligação do ligante Wnt aos receptores Frizzled, a fosforilação de LRP6 promove o recrutamento de Dishevelled, a inibição do complexo de destruição da β-catenina e a ativação transcricional de genes-alvo de Wnt que governam o padrão embrionário, a manutenção de células-tronco/progenitoras e a homeostase tecidual. A LRP6 também faz interface com vias que regulam o tráfego de receptores e a endocitose, conectando a dinâmica de membrana à amplitude do sinal. A atividade desregulada de Lrp6 tem sido associada a anomalias do desenvolvimento e a fenótipos alterados relacionados a ossos, metabolismo e neurobiologia, tornando-o um ponto útil para estudos mecanísticos de processos impulsionados por Wnt.

LRP6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Lrp6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LRP6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Lrp6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Lrp6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LRP6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Lrp6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LRP6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LRP6 em células tumorais com expressão de Lrp6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.